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木聚糖酶用什么方法检测活性?

 什么是木聚糖酶?

木聚糖是植物半纤维素的主要成分,为自然界中广泛存在、含量仅次于纤维素的可再生多糖资源,占细胞干重的7%一35%。木聚糖酶是一类能特异降解木聚糖的酶类,在造纸、食品、饮料、生物转化等行业有广泛的应用。

木聚糖酶活力的测定方法 木聚糖酶活力怎么检测

木聚糖酶活力的测定原理(分光光度法): 木聚糖酶能将底物木聚糖降解成寡糖和单糖,具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应,生成棕红色的氨基化合物。反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,而还原糖的生成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。因此,通过分光比色测定反应液颜色的强度,可以计算待测木聚糖酶的活力。 

木聚糖酶DNS测定方法步骤:将一定浓度和体积的木聚糖溶液和适当稀释倍数的酶液混合,在一定的温度下反应一定的时间后加入显色剂,终止反应,在选定的光波波长下测定反应液的OD值,然后根据酶活性单位定义计算出酶活性。根据用于木聚糖酶反应的显色剂的不同,还原糖法测木聚糖酶酶活性的主要方法是DNS法。

木聚糖酶

木聚糖酶活力定义:单位为(U) 在50℃、pH值为4.8的条件下,1min从浓度为5 mg/mL的木聚糖溶液中降解释放1 µmol还原糖(以木糖表示)所需要的酶量为一个酶活力单位(U)。其中样品的酶活力以 U / g表示。 

酶活力是衡量酶生物活性的重要指标,在实际测定中,酶活力的结果常与所采用的各项测定条件有关,采用不同的测定条件,会得出不同的结果,当前对于木聚糖酶活力的检测方法有很多,但都没有统一的标准(包括使用最为普及的DNS法测定木聚糖酶活力),常因应用面的不同,所采用的测定条件有所不同,导致对酶活力的最终测定结果很难进行比较。

为了测定的统一,同时使结果有较好的可比性,建议固定反应体系(即固定反应温度、pH值、反应时间、底物浓度和要求的产物浓度范围)。样品酶做不同的稀释度,只有在规定条件下产生所要求的产物浓度范围的稀释酶液才是有效的作用酶液,然后,以此为依据计算酶活力。这种方法虽然比较繁琐,但是它排除了许多干扰,有较好的可比性。

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