葡萄糖氧化酶酶活力定义：在PH 5.6，35℃温度.加氧的条件下，每分钟催化氧化1umol葡萄糖转化为葡萄糖酸的酶的量，为一个酶活力单位，以Titr表示。

酶活测定原理：葡萄糖氧化酶是一种需氧脱氢酶，能催化氧化葡萄糖生成葡萄糖酸。用过量的氢氧化钠中和生产的葡萄糖酸，再用盐酸返滴定，即可求得葡萄糖酸的产量，根据产葡萄糖酸量表示酶活高低。

2C6H12O6+2O2→2C6H12O7+ H2O2

C6H12O7+NaOH →C6H11O7Na+ H2O

酶活测定仪器设备：

恒温水浴锅、氧气瓶、磁力搅拌器、秒表、PH计、移液器、50ml酸式滴定管、试剂及配制、磷酸缓冲液

称取16.1gNaH2PO4.2H2O 和35.82g Na2HPO4.12H2O溶于800ml无CO2水中，用0.5mol/LNaOH或1mol/LHCL调节PH值至5.6，定容至1000ml，室温保存，7天内有效。

酶活测定试剂及配制：

1.1  2%葡萄糖磷酸缓冲液

称取2.00g葡萄糖溶于磷酸缓冲液中，定容至100ml。配制后室温静置2小时后再使用，冰箱保存24小时内有效。(因为葡萄糖有变旋现象, 放置是为了让葡萄糖分子各种构象达到,用磷酸溶解是平衡底物脱氢)

1.2  0.1mol/L NaOH标准溶液

按GB/T601-2002配制标定（准确至0.100 mol/L）

1.3   0.1mol/L HCL标准溶液

按GB/T601-2002配制标定

酶活检测测定步骤：

1.4  样品稀释液的制备

称取样品1g(精确到0.0001g)置研钵中，加入少量磷酸缓冲液研磨10min（研磨至无大颗粒）,移入100ml容量瓶中，用磷酸缓冲液磨洗研钵，保证样品全部移入容量瓶中，定容，摇匀（使酶液浓度控制大约3U/ml），待测样液在加入磷酸缓冲液后三小时内测定。

1.5  操作步骤

样品测定：取2%葡萄糖磷酸缓冲溶液25.00ml置250ml锥形瓶中，置于水浴锅中35℃预热5分钟，准确加入上述测定液3.00ml，立即置恒温水浴中，接入恒定压力大氧气管(管口通入液面下),反应20分钟取出（准确计时），取出氧气管,用少量水（大约5ml）冲洗管口处,立即准确加入0.1mol/L氢氧化钠溶液50.00ml，振摇终止反应，把反应液移入300ml烧杯，用少量无CO2蒸馏水（大约10-20ml）清洗锥形瓶两次，并把清洗液全部倒入烧杯中，磁力搅拌摇匀（不可用其他材料搅拌，例如玻棒），用0.1mol/L盐酸滴定到溶液PH值至8.0(用PH准确测定)，记录所消耗的盐酸毫升数.

空白对照：准确移取0.1mol/L氢氧化钠溶液50.00ml置300ml烧杯中，准确加入磷酸缓冲溶液25.00ml及3.00ml酶液，磁力搅拌摇匀，用0.1mol/L盐酸滴定其PH值至8.0(用PH准确测定)，记录所消耗的盐酸毫升数.（空白测定不加底物，不加氧，不加温）

酶活测定计算

葡萄糖氧化酶活力单位（Titr，u/g）=△V× N× f × 1000×3/(20×3×m)

△V---样品与空白所的消耗HCL的体积差

N---用于滴定的HCL的浓度

f---稀释因子（稀释倍数）

3---所加入的葡萄糖的量（umol）

20—为反应时间，按分钟计

3--- 加入的酶液体积

m --- 样品的质量 

1000--- 微摩尔与摩尔之间的转换系数

葡萄糖氧化酶酶活力测定注意事项：

1、 每次添加的氢氧化钠量对数据的准确性至关重要，每次添加量必须准确相等（用大肚移液管移取）,且每次检测时的空白样及样品添加的氢氧化钠浓度一致.

2、 每次检测的空白对照与样品的测定时间相差不大于2小时

3、样品终止反应后，反应液在20min内滴定，空白对照溶液在加入酶液20min内滴定

4、 因酶液静止放置过程中会有沉降现象，所以每次使用酶液前必须摇匀，保证酶液混合均匀。

5、 测定时所使用的玻璃仪器要用洗涤剂清洗用蒸馏水冲洗过后并烘干再使用

6、 氧气管口保持在液面下，保证氧气与反应液接触

取数原则：

为确保数据的准确性.科学性，重复试验3次，并分别（空白.样品）取平行相对极差小于5%的数据的平均值为计算数据，若无相对极差小于5%的数据须重新测定。