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影响胰蛋白酶水解酪蛋白的因素有那些?

酪蛋白又称干酪素、乳酪素、奶酪素等。是哺乳动物包括母牛,羊和人奶中的主要蛋白质。酪蛋白是牛乳中主要的蛋白质,约占牛乳蛋白质总量的80%~82%,是一种大分子蛋白质,消化极其慢。为此,人们通过对酪蛋白进行水解获得多肽类物质,这些多肽类物质不仅具有营养价值,更重要的是使其具有原蛋白质或其组成氨基酸所没有的功能,而且使其吸收利用率大为增加。但是目前水解存在的问题是:为了追求高水解度,蛋白酶大剂量使用导致成本增加,酶制剂浪费严重,增加生产的成本。通过试验在酶剂量和PH不变的前提下,测试不同作用时间、不同温度对酪蛋白水解度的影响。

酪蛋白的水解操作方法

称取1.0000g的酪蛋白,用25mL20mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.90)溶解,调节其pH至7.0,加入10mg胰蛋白酶,置于一定温度的水浴锅中进行水解,加入不同剂量的SDS混匀,经过一定反应时间后,将反应体系置于100℃水浴锅中煮沸5分钟,使胰蛋白酶灭酶失活,完成本次试验。

1、反应时间对酪蛋白水解度的影响 

底物浓度为4%、pH为7.0、酶的添加量为2500U/g、反应温度为50℃条件下,测定不同水解时间对酪蛋白水解度的影响。从图中可以看出,酪蛋白的水解度随酶解时间的延长而增大,当反应时间在40~80分钟时,水解度增长较快;当水解时间超过80分钟后,水解度随时间的增加而增大,但其增幅趋于平缓,因此,80分为最佳酪蛋白水解时间。

酪蛋白水解

反应时间对酪蛋白水解度的影响 

2、反应温度对酪蛋白水解度的影响 

在pH为7.0、底物浓度为4%、酶添加量为2500U/g、分别在30、40、50、60和70℃温度下反应60分钟,得到温度对酪蛋白水解度的影响。从图中可看出,温度为30℃时,酪蛋白水解度仅为2.87%,随着反应体系温度的升高,酪蛋白水解度逐渐增大50℃时,水解度趋于最大值,其水解度为6.92%,当温度高于60℃时,随着温度的升高,胰蛋白酶逐渐变性失活,酪蛋白的水解度反而呈现下降趋势,因此,试验选取50℃为最佳酪蛋白水解温度。

酪蛋白水解

反应温度对酪蛋白水解度的影响 

3、SDS对酪蛋白水解度的影响 

酶的添加量为2500U/g,在pH7.0,底物浓度为4%,反应温度为50℃,反应时间为80分钟条件下,测定不同剂量的SDS对酪蛋白水解度的影响。随着SDS浓度的增加,酪蛋白水解度逐渐增大,当反应体系中SDS的质量浓度为0.00128g/mL时,酪蛋白的水解度达到最大值13.5%,因此,试验选取0.00128g/mL为SDS最佳加入浓度。

酪蛋白水解

SDS对酪蛋白水解度的影响 

通过本次试验得出反应条件:在底物浓度为4%、加酶量2500U/g、pH为7.0、反应温度为50℃,水解时间为80分钟,,胰蛋白酶对酪蛋白的水解效果较佳,水解度为7.30%;同等条件下向此体系加入SDS,使SDS在体系中的终浓度为0.00128g/mL,水解度提高为13.50%,可见SDS对胰蛋白酶水解酪蛋白有明显促进作用。

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